Guido nació en una familia acomodada y tuvo una juventud agitada, pero a raíz de oír la predicación de un franciscano, cambió de vida. En 1211, hospedó en su casa a Francisco de Asís, a quien confió que quería ser discípulo. Cuando le preguntó qué tenía que hacer, Francisco le dijo que repartiera sus bienes entre los pobres y quedara libre, y Guido lo hizo así. Al día siguiente, recibió el hábito de la Orden de los Frailes Menores y fundó el convento de Santa Maria di Cortona. Fue ordenadosacerdote, recibiendo del mismo Francisco el permiso para predicar. Dedicó su vida a la predicación, la plegaria y la caridad, adquiriendo fama de santidad, especialmente en su ciudad natal.
Se le atribuyeron milagros, como haber convertido agua en vino, haber multiplicado sacos de harina, curar un paralítico y resucitar a una chica que se había caído a un pozo.
Según otra leyenda, antes de morir, Francisco de Asís, muerto hacía veinte años, se le apareció para anunciarle cuándo moriría.